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豬乙型腦炎病毒抗體(IgG)診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
說(shuō)明書(shū)
【產(chǎn)品名稱(chēng)】
通用名稱(chēng):豬乙型腦炎病毒抗體(IgG)診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名稱(chēng):Porcine Japanese B Encephalitis Virus Antibody Test Kit (ELISA), JEV Ab
【規(guī)格】
96×2測(cè)試/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒用于定性測(cè)定豬血清中日本乙型腦炎病毒(又稱(chēng)流行性乙型腦炎)IgG抗體。用于評(píng)估豬場(chǎng)豬乙型腦炎病毒疫苗免疫狀況,感染豬的血清學(xué)診斷以及豬乙型腦炎病毒的流行病學(xué)調(diào)查。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)原理,由包被有高純度的豬乙型腦炎抗原的微孔反應(yīng)板、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機(jī)理為包被抗原與樣本中的JEV-IgG結(jié)合,再與酶標(biāo)抗豬IgG抗體形成“包被抗原+JEV-IgG+酶標(biāo)抗豬IgG抗體”復(fù)合物,加入顯色劑,通過(guò)酶催化反應(yīng)顯色。顯色深淺與JEV-IgG的量成正比,當(dāng)顯色超過(guò)設(shè)定的臨界值時(shí)結(jié)果判為陽(yáng)性,表明免疫有效或有自然感染。
【要組成成份】`
1 | JEV抗原包被板 | 96T×2 | |
2 | 酶標(biāo)記物 | 22ml | 黃色帽 |
3 | 樣本稀釋液 | 50ml | 透明帽 |
4 | JEV-IgG陰性對(duì)照血清 | 1.5ml | 綠色帽 |
5 | JEV-IgG陽(yáng)性對(duì)照血清 | 1.5ml | 紅色帽 |
6 | 顯色劑 | 12ml×2 | 橙色帽 |
7 | 終止液 | 12ml | 藍(lán)色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 50ml | 白色帽 |
9 | 蓋板膜 | 2張 |
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10 | 說(shuō)明書(shū) | 1份 |
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【自備器材】
1.酶標(biāo)儀( 450nm 630nm濾光片)
2.微量移液器(單道1-100ul、0.5-10ul、多道 30-300ul)
3.水浴箱或恒溫箱
4.微量振蕩器
5.一次性槍頭(10ul、200ul)
6.去離子水
【樣本要求】
1.本試劑檢測(cè)的樣本為豬血清,樣本應(yīng)無(wú)菌采集,2℃~8℃貯存不超過(guò)一周,長(zhǎng)期應(yīng)在-20℃以下保存,避免反復(fù)凍融。
2.避免使用嚴(yán)重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長(zhǎng)菌的樣本。
【實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備】
1.試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實(shí)驗(yàn)前,先取出置室溫30min。酶標(biāo)板應(yīng)在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開(kāi)。
2.樣本稀釋:用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋?zhuān)ɡ簩?ul樣本加至195ul樣本稀釋液中)。
3.配制洗滌液:將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍(例:將50ml洗滌液加入950ml去離子水中)。若20倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶,屬正常現(xiàn)象,放置37℃至溶解后即可。
【操作步驟】
1.加樣:根據(jù)樣本數(shù)量,取所需板條。設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照各2孔,分別加入不稀釋的陰、陽(yáng)性對(duì)照血清100μl于相應(yīng)孔中。其余為樣本孔,每孔加入稀釋好的樣本100μl。
2.溫育:加樣后,蓋上蓋板膜,置37℃溫育30分鐘。
3.洗板:甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液注滿(mǎn)反應(yīng)板孔,洗滌3次,每次停留10秒,后一次洗后拍干。
4.加酶:每孔加酶標(biāo)記物100μl。
5.溫育:加好酶標(biāo)記物后,蓋好蓋板膜,置37℃溫育30分鐘。
6.洗板:同步驟3。
7.顯色:每孔加顯色劑100μl,振蕩混勻,37℃避光反應(yīng)10分鐘。
8.終止:每孔加終止液50μl,振蕩10秒,充分混勻。終止后即讀數(shù)。
9.讀數(shù):以450nm/ 630nm雙波長(zhǎng)檢測(cè),讀取各孔吸光度值(OD值)。
【結(jié)果判定】
在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔的OD值。檢測(cè)結(jié)果有效的條件是陽(yáng)性對(duì)照孔的平均OD值≥0.6,陰性對(duì)照孔的平均OD值必須<0.1。
樣品中抗體存在與否,或樣本中抗體的相對(duì)水平的高低由S/P值決定,S/P值計(jì)算時(shí)按以下方式處理:
S/P=(樣本OD450/630值-NCx(—))/(PCx(—)-NCx(—)),其中NCx(—)表示陰性對(duì)照孔平均OD值(0.05以下的數(shù)值按0.05計(jì)算),PCx(—)表示陽(yáng)性對(duì)照孔平均OD值;
當(dāng)樣本的S/P≥0.25時(shí)判為陽(yáng)性;樣品S/P值<0.25時(shí)判為陰性。
【注意事項(xiàng)】
1.本試劑盒僅用供研究使用。
2.使用試劑盒之前,一定要仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。
3.實(shí)驗(yàn)廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘,或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。
4.未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封4℃保存。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋,與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存。不同批號(hào)的試劑組份不可混用。
5.應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性。
6.加洗滌液時(shí)應(yīng)做到滿(mǎn)而不溢,防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。
7.終止液有腐蝕性,若濺到皮膚或衣物上應(yīng)立即用大量清水沖洗干凈。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
于2℃~8℃避光保存,防止冷凍,有效期12個(gè)月。
【生產(chǎn)日期及批號(hào)】
詳見(jiàn)包裝袋和外包裝盒。
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